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Recombinant Mouse ICAM-1/CD54 Protein

來源: 發(fā)布時間:2025-01-24

耐高鹽全能核酸酶(SaltActiveUltraNuclease)是一種重組非特異性核酸內切酶,具有以下特點和應用:1.**來源與表達**:耐高鹽全能核酸酶來源于海洋微生物,通過基因工程改造在大腸桿菌(_Escherichiacoli_)中表達純化。2.**活性條件**:在0.5MNaCl條件下具有比較好活性,這使得它在高鹽環(huán)境下也能保持高效。3.**應用領域**:-**病毒純化、疫苗生產**:作為宿主殘留核酸去除試劑,將宿主殘留核酸降至皮克(pg)級別,提高生物制品功效和安全性。-**蛋白和多糖類制藥工業(yè)**:用于去除核酸污染,降低細胞上清和細胞裂解液的粘度,提高蛋白純化效率及功能研究。-**防止細胞結團**:有效防止細胞和疫苗研究中外周血單核細胞(PBMC)的結團。4.**產品性質**:-分子量:24.7kDa。-等電點:9.61。-純度:≥99%。-酶活:250-300U/μL。-適溫度:37℃(工作范圍0-42℃)。-輔助因子:1-10mMMg2+。5.**儲存條件**:以無菌液體酶的形式提供,儲存于緩沖液(25mMTris-HCl,5mMMgCl2,500mMNaCl,50%Glycerol,pH7.5)中,無色透明液體。干冰運輸,-15℃~-25℃保存,有效期2年。Cas12a還可以高效地在一些重要的工業(yè)鏈霉菌菌株中產生編輯,這些菌株由于毒性而不能使用SpCas9進行編輯。Recombinant Mouse ICAM-1/CD54 Protein,His Tag

Recombinant Mouse ICAM-1/CD54 Protein,His Tag,標準物質

在DNA提取過程中避免RNA污染的關鍵在于采取一系列措施來確保RNA被有效去除或降解,同時保護DNA的完整性和純度。以下是一些確保DNA提取過程中避免RNA污染的策略:1.**使用專門的DNA提取試劑盒**:選擇高質量的DNA提取試劑盒,這些試劑盒通常已經包含了防止RNA污染的措施,如特定的裂解液和純化步驟,能夠有效去除RNA。2.**加入RNA酶(RNase)處理**:在DNA提取過程中加入RNase處理步驟,可以有效地去除殘留的RNA污染。RNase是一種能夠特異性降解RNA的酶,可以在不影響DNA完整性的前提下去除RNA污染。3.**優(yōu)化實驗操作步驟**:在破碎細胞時,選擇合適的破碎方法和破碎時間,避免過度破碎導致RNA的釋放;在DNA純化階段,控制好離心速度和時間,避免RNA的沉淀。4.**使用無RNase的試劑和耗材**:使用經過RNase-free處理的實驗器材和試劑,確保實驗過程中不會引入外源性RNA污染。5.**嚴格控制實驗環(huán)境**:保持實驗室臺面和工作區(qū)域干凈無塵,定期對實驗室進行消殺,避免RNA酶污染。6.**個人防護和操作規(guī)范**:在處理DNA樣品時,佩戴無菌手套和口罩,以減少呼吸道和皮膚污染的風險。使用不同的工具處理不同的樣品,或者在處理前后徹底清洗工具,避免交叉污染。Recombinant Human Siglec-3/CD33 Protein,His-Avi TagFnCas12a產品不含DNA內切酶和外切酶,也不含RNA酶,保證了實驗的準確性和重復性。

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T5核酸外切酶在基因編輯中確實有應用,并且具有一些優(yōu)勢:1.**提高編輯效率**:根據一篇研究文章,T5核酸外切酶可以與CRISPR/Cas系統(tǒng)共表達或融合,以提高基因編輯的效率。這種共表達或融合可以增加indel(插入和缺失)頻率,盡管增加的幅度可能不大。2.**增強基因編輯效果**:在另一項研究中,通過使用螺旋-螺旋二聚體肽(coiled-coilpeptides)將T5核酸外切酶招募到Cas9或Cas12a蛋白上,可以提高基因編輯的效率,這種方法被稱為CCExo(CRISPR-Coiled-coil-Exonuclease)。這種招募方式優(yōu)于共表達和直接融合,其中強的親和力CC對顯示出高的突變頻率和刪除長度。3.**應用于多種細胞類型**:CCExo系統(tǒng)在多種細胞系和原代細胞中都能有效地提高基因失活效率,并且在慢性髓性白血?。–ML)患者的原代細胞以及異種移植動物模型中展示了其應用潛力,這表明CCExo方法可能成為CML和其他遺傳性疾病的潛在選擇。T5核酸外切酶與CRISPR核酸酶蛋白進行融合,并引入了核定位信號(NLS)序列以構建表達載體,用于基因編輯。綜上所述,T5核酸外切酶在基因編輯中的應用可以增強編輯效率和效果,尤其是在與CRISPR/Cas系統(tǒng)結合使用時。

耐高鹽全能核酸酶與一般核酸酶的主要區(qū)別體現在以下幾個方面:1.**鹽耐受性**:-**耐高鹽全能核酸酶**:具有較高鹽濃度耐受性,在150-900mM鹽濃度范圍內有效,尤其在600-700mM鹽濃度下活性比較好。-**一般核酸酶**:大多數全能核酸酶在高鹽環(huán)境下會失活,酶切效果降低。2.**活性條件**:-**耐高鹽全能核酸酶**:在0.5MNaCl條件下具有比較好活性,這使得它在高鹽環(huán)境下也能保持高效。-**一般核酸酶**:可能在低鹽或無鹽條件下活性更高,但在高鹽條件下活性受限。3.**應用領域**:-**耐高鹽全能核酸酶**:廣泛應用于生產工藝流程中高鹽環(huán)境下核酸污染去除,如病毒純化、疫苗生產、蛋白和多糖類制藥工業(yè)等。-**一般核酸酶**:可能更多用于一般的分子生物學實驗,如DNA或RNA的降解,但不特別針對高鹽環(huán)境。4.**酶切效果**:-**耐高鹽全能核酸酶**:能夠有效去除核酸殘留,將所有類型的DNA和RNA降解為3~5個堿基片段。-**一般核酸酶**:酶切效果可能受到高鹽環(huán)境的影響,導致效率降低。5.**pH范圍**:-**耐高鹽全能核酸酶**:具有寬泛的pH范圍(7.0-11.0),在這一范圍內保持活性。-**一般核酸酶**:可能具有更窄的pH活性范圍。UDG在結構上屬于單功能DNA糖基化酶,它通過沿著DNA鏈滑動,識別尿嘧啶分子,進行堿基切除。

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T5核酸外切酶在基因克隆中的優(yōu)勢主要體現在以下幾個方面:1.**高效性**:T5核酸外切酶依賴性組裝(TEDA)方法在常規(guī)克隆中的效率與使用專有DNA聚合酶的商業(yè)In-Fusion方法相似,但高于使用T5核酸外切酶、PhusionDNA聚合酶和DNA連接酶的Gibson方法。2.**低成本**:TEDA方法每個反應使用0.04U的T5核酸外切酶,價格為0.25美分,具有很高的成本效益。3.**簡單性**:TEDA方法的反應混合物非常簡單,易于操作,這使得它在預算有限的實驗室中尤其有用。4.**靈活性**:TEDA方法能夠組裝多個DNA片段,并在多個位點同時進行定點誘變,提供了一種靈活的克隆和突變方法。5.**陽性克隆率**:使用T5核酸外切酶的無縫克隆技術可以確保100%的陽性克隆率,這提高了實驗的成功率。6.**協(xié)同作用**:在無縫克隆中,T5核酸外切酶與Phusion高保真DNA聚合酶和TaqDNA連接酶協(xié)同作用,通過切割、填補和連接三個步驟,高效地完成DNA片段的連接。7.**減少污染**:T5核酸外切酶可以降解堿裂解提取質粒中的變性DNA,減少超螺旋DNA的污染,提高DNA克隆和轉染效率。這些優(yōu)勢使得T5核酸外切酶成為基因克隆中一個非常有價值的工具,尤其是在需要高效、低成本和操作簡便的實驗環(huán)境中。Pfu DNA Polymerase與Taq酶的對比:與Taq酶相比,Pfu DNA Polymerase的錯誤率更低,適合高精度實驗。1st Strand cDNA Synthesis Kit(RNase H-)(with gDNA Eraser)

通過測序或基于PCR的方法(如T7E1酶切和測序)來驗證gRNA的編輯效率,篩選出效率高的gRNA序列 。Recombinant Mouse ICAM-1/CD54 Protein,His Tag

磁珠法質粒小量抽提試劑盒是一種利用磁性納米顆粒固相核酸富集技術來純化質粒DNA的產品。它通常包括高性能納米磁珠和獨特的緩沖體系組合,通過裂解菌體后釋放的DNA,能夠有效地結合于磁珠表面,漂洗除雜后獲得高質量的目的質粒。以下是磁珠法質粒小量抽提試劑盒的一些主要特點和應用:1.**快速簡便**:操作步驟簡單,無需多次離心,整個抽提過程通常只需20-25分鐘。2.**高得率和純度**:可以從1-5ml新鮮大腸桿菌菌液中分離純化2-20μg高質量的質粒DNA。純化得到的DNA質量高,完整性好,OD260/280比值一般為1.8~1.9之間,OD260/230比值大于2.0。3.**適用性廣**:適用于1-5mL小體積高通量菌液質粒抽提,且抽提所得的質粒DNA可直接用于酶切、測序、文庫篩選、連接和轉化等各種下游分子生物學實驗。4.**自動化兼容**:可整合移液法自動化儀器和磁棒法自動化儀器進行高通量提取實驗。5.**安全性高**:操作過程中不涉及酚/氯仿等有毒試劑,更加環(huán)保和安全。6.**成本效益**:相比傳統(tǒng)的離心柱法,磁珠法可以減少離心次數,獲得完整性更好的質粒,且操作更為簡便快捷。7.**操作靈活**:磁珠的使用量可靈活調節(jié),適合不同體積和濃度的樣品處理。Recombinant Mouse ICAM-1/CD54 Protein,His Tag