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美國全自動多光子顯微鏡研究

來源: 發(fā)布時間:2021-09-16

使用MPM對神經元進行成像時,通過隨機訪問掃描—即激光束在整個視場上的任意選定點上進行快速掃描—可以只掃描感興趣的神經元,這樣不僅避免掃描到任何未標記的神經纖維,還可以優(yōu)化激光束的掃描時間。隨機訪問掃描可以通過聲光偏轉器(AOD)來實現,其原理是將具有一個射頻信號的壓電傳感器粘在合適的晶體上,所產生的聲波引起周期性的折射率光柵,激光束通過光柵時發(fā)生衍射。通過射頻電信號調控聲波的強度和頻率從而可以改變衍射光的強度和方向,這樣使用1個AOD就可以實現一維橫向的任意點掃描,利用1對AOD,結合其他軸向掃描技術可實現3D的隨機訪問掃描。但是該技術對樣本的運動很敏感,易出現運動偽影。目前,快速光柵掃描即在FOV中進行逐行掃描,由于利用算法可以輕松解決運動偽影而被普遍的使用。光子顯微成像技術不是什么新技術,早在20多年前就有了,目前已經在生命科學和材料科學中廣泛應用。美國全自動多光子顯微鏡研究

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多束掃描技術可以同時對神經元組織的不同位置進行成像該技術:對兩個遠距離(相距大于1-2 mm)的成像部位,通常使用兩條單獨的路徑進行成像;對于相鄰區(qū)域,通常使用單個物鏡的多光束進行成像。多光束掃描技術必須特別注意激發(fā)光束之間的串擾問題,這個問題可以通過事后光源分離方法或時空復用方法來解決。事后光源分離方法指的是用算法來分離光束消除串擾;時空復用方法指的是同時使用多個激發(fā)光束,每個光束的脈沖在時間上延遲,這樣就可以暫時分離被不同光束激發(fā)的單個熒光信號。引入越多路光束就可以對越多的神經元進行成像,但是多路光束會導致熒光衰減時間的重疊增加,從而限制了區(qū)分信號源的能力;并且多路復用對電子設備的工作速率有很高的要求;大量的光束也需要更高的激光功率來維持近似單光束的信噪比,這會容易導致組織損傷。共聚焦多光子顯微鏡成像深度多光子顯微鏡涉及醫(yī)學、生物學、化學、物理學、電子學、工程學等學科,生產工藝相對復雜,進入門檻較高。

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對于雙光子(2P)成像而言,離焦和近表面熒光激發(fā)是兩個比較大的深度限制因素,而對于三光子(3P)成像這兩個問題大大減小,但是三光子成像由于熒光團的吸收截面比2P要小得多,所以需要更高數量級的脈沖能量才能獲得與2P激發(fā)的相同強度的熒光信號。功能性3P顯微鏡比結構性3P顯微鏡的要求更高,它需要更快速的掃描,以便及時采樣神經元活動;需要更高的脈沖能量,以便在每個像素停留時間內收集足夠的信號。復雜的行為通常涉及到大型的大腦神經網絡,該網絡既具有局部的連接又具有遠程的連接。要想將神經元活動與行為聯系起來,需要同時監(jiān)控非常龐大且分布普遍的神經元的活動,大腦中的神經網絡會在幾十毫秒內處理傳入的刺激,要想了解這種快速的神經元動力學,就需要MPM具備對神經元進行快速成像的能力??焖費PM方法可分為單束掃描技術和多束掃描技術。

多光子激發(fā)的特點。激發(fā)波長∶兩個或多個光子同時激發(fā),激發(fā)波長是單光子激發(fā)波長的兩倍或多倍(i.e.紅光能激發(fā)UV探針)。多光子激發(fā)∶依賴于多個光子同時到達的時間。使用脈沖飛秒激光器(i.e.10-16 seconds),且能提供更高的峰值功率。熒光限制在焦點處,能滿足多個光子同時達到產生多光子吸收。熒光強度正比于(激光強度)n。為什么使用飛秒激光器?多光子激發(fā)需要超快的激光器,皮秒脈沖不能實現三光子激發(fā)。深度成像需要更高、更窄脈沖輸出功率。多光子激發(fā)光源處于近紅外區(qū),對細胞毒性和光漂白更小。帶寬足以覆蓋鈦藍寶石激光器的可調諧范圍和用于多光子顯微鏡的許多其它激光器的典型中心頻率。

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多光子激發(fā)掃描顯微成像系統(tǒng)的不足。只能對熒光成像。如果樣品包括能夠吸收激發(fā)光的色團,如色素,樣品可能受到熱損傷。分辨率略有降低,雖然可以通過同時利用共焦的小孔得到改善,但是信號會有損耗。受昂貴的超快激光器限制,多光子掃描顯微鏡的成本較高。多光子激發(fā)顯微鏡應用舉例。動物和腦片神經細胞結構與功能、動物腦皮層的成像、胚胎發(fā)育過程的長時間動態(tài)觀測、多光子激發(fā)光解籠、細胞內微區(qū)鈣動力學、多光子激發(fā)自發(fā)熒光、其它應用。全球多光子顯微鏡主要生產地區(qū)分析,包括產量、產值份額等。美國布魯克多光子顯微鏡供應商

多光子顯微鏡能提供多種對比度機制。美國全自動多光子顯微鏡研究

儀器儀表行業(yè)本身是一個加入,產出周期較長的行業(yè),所以作為業(yè)內廠家,一方面要尋找中、短期市場熱點,另一方面也要在產品、技術研發(fā)方面有長遠的規(guī)劃;目前,nVista,nVoke,3D bioplotte,invivo等產品的產量居世界前列,實驗分析儀器等中產品的市場占比不斷上升,行業(yè)技術上總體已達到的中等國際水平,少數產品接近或達到當前較高國際水平。生物科技,醫(yī)藥科技領域內的技術開發(fā)、技術咨詢、技術服務、技術轉讓,實驗室設備、儀器儀表、醫(yī)療器械、計算機、軟件及輔助設備銷售,計算機數據處理,貨物及技術進出口業(yè)務。 成像平臺: 1. Inscopix自由活動超微顯微成像系統(tǒng) 2. DiveScope多通道內窺鏡系統(tǒng) 3. 雙光子顯微鏡 動物行為學平臺: 1. PiezoSleep無創(chuàng)睡眠檢測系統(tǒng) 2. 自身給藥、條件恐懼、斯金納、睡眠剝奪、跑步機、各類經典迷宮等 神經電生理: 1.NeuroNexus神經電極 2.多通道電生理信號采集系統(tǒng) 3.膜片鉗系統(tǒng) 4.AO功能神經外科臨床電生理平臺 顯微細胞: 1. UnipicK單細胞挑選及顯微切割系統(tǒng) 科研/臨床級3D打印 1. 德國envisionTEC 3D Bioplotter生物打印機 2. 韓國Invivo醫(yī)療級生物打印機等。產品普遍運用于工業(yè)、農業(yè)、交通、科技、環(huán)保、**、文教衛(wèi)生、大家生活等各個領域,在旺盛市場需求的帶動下和我國宏觀調控政策的引導下,我國儀器儀表行業(yè)的發(fā)展有了長足的進步空間?!盎ヂ摼W+”、大數據、020、萬物互聯網、P2P、分享經濟等熱門詞匯的出現,各個行業(yè)制定相應的措施來順應時代的經濟發(fā)展,以爭取更大的發(fā)展市場。而互聯網的出現也為儀器儀表行業(yè)參與國際競爭提供了機會,有利于銷售企業(yè)實現技術創(chuàng)新升級。美國全自動多光子顯微鏡研究