膜片鉗技術(shù)的發(fā)展∶全自動(dòng)膜片鉗技術(shù)(Automatedpatchclamptechnique)的出現(xiàn)標(biāo)志著膜片鉗技術(shù)已經(jīng)發(fā)展到了一個(gè)嶄新階段,從這個(gè)意義上說,前面所講的膜片鉗技術(shù)我們稱之為傳統(tǒng)膜片鉗技術(shù)(Traditionalpatchclamptechnique),傳統(tǒng)膜片鉗技術(shù)每次只能記錄一個(gè)細(xì)胞(或一對(duì)細(xì)胞),對(duì)實(shí)驗(yàn)人員來(lái)說是一項(xiàng)耗時(shí)耗力的工作,不適合在藥物開發(fā)初期和中期進(jìn)行大量化合物的篩選,也不適合需要記錄火量細(xì)胞的基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)研究。全自動(dòng)膜片鉗技術(shù)的出現(xiàn)在很大程度上解決了這些問題,它不僅通量高,一次能記錄幾個(gè)甚至幾十個(gè)細(xì)胞,而且從找細(xì)胞、形成封接、破膜等整個(gè)實(shí)驗(yàn)操作實(shí)現(xiàn)了自動(dòng)化,免除了這些操作的復(fù)雜與困難。這兩個(gè)優(yōu)點(diǎn)使得膜片鉗技術(shù)的工作效率提高了!全自動(dòng)膜片鉗技術(shù)采用的標(biāo)本必須是懸浮細(xì)胞,像腦片這類標(biāo)本無(wú)法采用。此外,全自動(dòng)膜片鉗技術(shù)只能進(jìn)行全細(xì)胞記錄模式、穿孔膜片鉗記錄模式以及細(xì)胞貼附式單通道記錄模式,而不能進(jìn)行其他模式的記錄。對(duì)離子通道功能的研究,主要采用記錄離子通道電流來(lái)間接反映離子通道功能。單電極膜片鉗報(bào)價(jià)
膜片鉗技術(shù)與其他技術(shù)的結(jié)合Neher等**將膜片鉗技術(shù)與Fura2熒光鈣測(cè)量技術(shù)相結(jié)合,同時(shí)進(jìn)行細(xì)胞內(nèi)熒光強(qiáng)度、細(xì)胞膜離子通道電流、細(xì)胞膜電容等多項(xiàng)指標(biāo)變化的快速交替測(cè)量,從而獲得同一事件過程中各因素的各自變化,進(jìn)而分析這些變化之間的關(guān)系。Neher將能夠光解鈣離子的鈣螯合物引入膜片鉗技術(shù),進(jìn)而可以定量研究鈣離子濃度與分泌速率的關(guān)系以及相對(duì)較大的分泌速率。他還發(fā)明了膜片鉗的膜電容檢測(cè)與碳纖維電極的電化學(xué)檢測(cè)相結(jié)合的技術(shù)。然后***將光電聯(lián)合檢測(cè)技術(shù)和碳纖維電極電化學(xué)檢測(cè)技術(shù)相結(jié)合。這種結(jié)合既能研究分泌機(jī)制,又能鑒定分泌物質(zhì),彌補(bǔ)了各單一方法的不足。Eberwine于1991年***將膜片鉗技術(shù)與RT-PCR技術(shù)相結(jié)合,可以在分子水平上解釋形態(tài)相似但電活動(dòng)不同的結(jié)果,隨后開始了膜片鉗與分子生物學(xué)技術(shù)相結(jié)合的時(shí)代:基因重組技術(shù)和膜通道蛋白重建技術(shù)。德國(guó)全細(xì)胞膜片鉗電生理技術(shù)準(zhǔn)確捕捉離子通道動(dòng)態(tài),膜片鉗技術(shù)助您一臂之力!
膜片鉗的應(yīng)用范圍:1.單離子通道(如鈉、鉀)的功能研究;2.心肌細(xì)胞離子通道研究(尤其與藥物作用相關(guān)的);3.常規(guī)與病理的離子通道作用機(jī)制研究;4.單細(xì)胞的形態(tài)與功能關(guān)系的研究;5.心血管藥理學(xué)的研究;6.腦片膜片鉗(證實(shí)了腦組織在體外也能存活并保持很好的活性狀態(tài),能使對(duì)腦細(xì)胞的研究更接近生理狀態(tài)下的情況,可檢驗(yàn)不同腦區(qū)間的神經(jīng)通路與功能鏈接);7.神經(jīng)環(huán)路的研究(光遺傳或化學(xué)遺傳病毒載體表達(dá)的驗(yàn)證);8.神經(jīng)突觸可塑性的研究。
把膜電位鉗位電壓調(diào)到-80--100mV,再用鉗位放大器的控制鍵把全細(xì)胞瞬態(tài)充電電流調(diào)定至零位(EPC-10的控制鍵稱為C-slow和C-series;Axopatch200標(biāo)為全細(xì)胞電容和系列電阻)。寫下細(xì)胞的電容值Cc和未補(bǔ)整的系列電阻值Rs,用于消除全細(xì)胞瞬態(tài)電流,計(jì)算鉗位的固定時(shí)間(即RsCc),然啟根據(jù)歐姆定律從測(cè)定脈沖電流的振幅算出細(xì)胞的電阻RC。緩慢調(diào)節(jié)Rs旋鈕注意測(cè)定脈沖反應(yīng)的變化,逐漸增加補(bǔ)整的比例。如果RS補(bǔ)整非常接近振蕩的閾值,RS或Cc的微細(xì)變化都會(huì)達(dá)到震蕩的閾值,產(chǎn)生電壓的振蕩而使細(xì)胞受損。因此應(yīng)當(dāng)在RS補(bǔ)整水平寫不穩(wěn)定閾值之間留有10%-20%的余地為安全。準(zhǔn)備資料收集和脈沖序列的測(cè)定。膜片鉗,帶您進(jìn)入細(xì)胞膜電生理的奇妙世界!
ePatch的設(shè)計(jì)的一些亮點(diǎn)還包括:可以在軟件中伴隨數(shù)據(jù)進(jìn)行實(shí)驗(yàn)記錄,你不用再專門拿一個(gè)實(shí)驗(yàn)記錄本了,也不用再擔(dān)心本本上記錄的內(nèi)容找不到對(duì)應(yīng)的數(shù)據(jù)了,系統(tǒng)會(huì)把他們一一對(duì)應(yīng)起來(lái)。電壓電流刺激模式的編輯更為傻瓜,眾多的模塊,直接拖拽就可以,還伴隨著示例圖,讓你對(duì)你編輯的程序一目了然。實(shí)時(shí)的全細(xì)胞參數(shù)估算,包括封接電阻,膜電容,膜電阻等重要參數(shù)強(qiáng)大的在線分析功能,包括電壓鉗模式下的I/Vgraph,eventdetection,F(xiàn)FT,以及電流鉗模式下的APthresholddetection,APfrequency,APslope等數(shù)據(jù)可保存成多種格式,你要是個(gè)程序達(dá)人,可以支持使用Matlab進(jìn)行數(shù)據(jù)分析,如果沒有這樣的經(jīng)驗(yàn)也沒有問題,數(shù)據(jù)可以保存成.abf用的Clampfit直接分析。滔博生物TOP-Bright專注基于多種離子通道靶點(diǎn)的化合物體外篩選,服務(wù)于全球藥企的膜片鉗公司,快速獲得實(shí)驗(yàn)結(jié)果,專業(yè)團(tuán)隊(duì),7*60小時(shí)隨時(shí)人工在線咨詢.膜片鉗放大器系統(tǒng)(以下簡(jiǎn)稱IPA系統(tǒng))是高度自動(dòng)化的膜片鉗放大器系統(tǒng),所有的功能均通過計(jì)算機(jī)軟件完成。美國(guó)全細(xì)胞膜片鉗多少錢
封接(seal)是膜片鉗記錄的關(guān)鍵步驟之一。單電極膜片鉗報(bào)價(jià)
膜片鉗技術(shù)實(shí)現(xiàn)了小片膜的孤立和高阻封接的形成,由于高阻封接使背景噪聲水平降低,相對(duì)地增寬了記錄頻帶范圍,提高了分辨率。另外,它還具有良好的機(jī)械穩(wěn)定性和化學(xué)絕緣性。而小片膜的孤立使對(duì)單個(gè)離子通道進(jìn)行研究成為可能。單通道電流1.典型的單通道電流呈一種振幅相同而持續(xù)時(shí)間不等的脈沖樣變化。他有兩個(gè)電導(dǎo)水平,即O和1,分別對(duì)應(yīng)通道的關(guān)閉和開效狀態(tài)。2.有的矩形脈沖簇狀發(fā)放時(shí),通道電流不在同一水平,可以明顯觀察到不同數(shù)目離子通道所形成的電流臺(tái)階,從而可推斷出被測(cè)膜片的通道數(shù)目。3.有的通道可記錄到圓滑型和方波形兩種形式。4.有些通道開放活動(dòng)是持續(xù)開放,中間被閃動(dòng)樣的關(guān)閉所中斷,形成burst開放。有些通道開放活動(dòng)是簇狀開放與短期平靜交替出現(xiàn),形成簇狀發(fā)放串(Cluster)單電極膜片鉗報(bào)價(jià)