納米顆粒遞送藥物并發(fā)揮功能的能力在很大程度上取決于它們被細(xì)胞攝取的機(jī)制。以蒲公英湯劑體為例，研究發(fā)現(xiàn)親溶酶體物質(zhì)能***抑制蒲公英湯劑體進(jìn)入細(xì)胞；巨胞飲抑制劑細(xì)胞松弛素D和阿米洛利能***降低蒲公英湯劑體的胞內(nèi)攝入，且呈現(xiàn)劑量依賴性，敲減Rac1和PAK1也有效地抑制其進(jìn)入細(xì)胞。這些結(jié)果提示蒲公英湯劑體通過內(nèi)吞進(jìn)入A549細(xì)胞且主要由巨胞飲介導(dǎo)26。同理，RNA轉(zhuǎn)染試劑在某些情況下也可能利用巨胞飲途徑進(jìn)入細(xì)胞。電穿孔轉(zhuǎn)染中的內(nèi)吞途徑電穿孔轉(zhuǎn)染是一種用于基因遞送的技術(shù)，在研究其機(jī)制時發(fā)現(xiàn)，用冰冷介質(zhì)處理或在電穿孔轉(zhuǎn)染前使用內(nèi)吞抑制劑處理三種不同的人類細(xì)胞系（HEK293、HCT116和HT29）。結(jié)果表明，用冰冷介質(zhì)、氯丙嗪或染料木黃酮處理會***降低所有三種細(xì)胞系的電穿孔轉(zhuǎn)染效率，但阿米洛利處理對電穿孔轉(zhuǎn)染效率影響不***。對于用小干擾RNA（siRNA）處理的細(xì)胞，只有敲低網(wǎng)格蛋白重鏈（CLTC）會導(dǎo)致所有三種細(xì)胞系的電穿孔轉(zhuǎn)染效率降低。這些數(shù)據(jù)表明，網(wǎng)格蛋白介導(dǎo)的內(nèi)吞作用在電穿孔轉(zhuǎn)染中起著重要作用27。轉(zhuǎn)染是將外源核酸送入細(xì)胞的過程，其目的是使外源基因編碼的蛋白能夠在細(xì)胞中表達(dá)。江蘇懸浮細(xì)胞轉(zhuǎn)染試劑

    核細(xì)胞、關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞、間充質(zhì)干細(xì)胞（MSCs）：選擇兩種合成轉(zhuǎn)染試劑（陽離子脂質(zhì)商業(yè)試劑LipofectamineRNAiMAX和聚乙烯亞胺（PEI））以及兩種天然衍生轉(zhuǎn)染試劑（多糖殼聚糖（98%脫乙酰化）和透明質(zhì)酸（20%酰胺化）），用于將siRNA遞送到包括髓核細(xì)胞、關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞和間充質(zhì)干細(xì)胞在內(nèi)的原代間充質(zhì)細(xì)胞中。以甘油醛-3-磷酸脫氫酶（***DH）作為內(nèi)源性模型基因，在轉(zhuǎn)染后第3天和第6天評估由20nM或200nMsiRNA引起的沉默程度。除了沉默效率外，還評估了細(xì)胞毒性、DNA含量變化和細(xì)胞分化潛能等非特異性影響。在四種轉(zhuǎn)染試劑中，基于商業(yè)脂質(zhì)體的試劑在20nMsiRNA時是**有效的siRNA遞送試劑，其次是殼聚糖。使用陽離子脂質(zhì)體、殼聚糖和PEI轉(zhuǎn)染顯示出不同程度的活力和DNA含量下降，這取決于所評估的siRNA劑量和細(xì)胞類型，但與***DH敲低無關(guān)。一些對DNA含量的影響并不伴隨著活力的相應(yīng)變化。然而，細(xì)胞周期抑制或進(jìn)展的標(biāo)記基因（如p21和PCNA）的表達(dá)變化不能解釋DNA含量的變化。有趣的是，發(fā)現(xiàn)了***DH活性的非特異性上調(diào)，這***于軟骨細(xì)胞15。肝*細(xì)胞HepG2和：比較兩種人類細(xì)胞模型中兩種轉(zhuǎn)染劑，即基于脂質(zhì)體的Lipofectamine?RNAiMAX和基于聚合物的GenMute?。 合肥轉(zhuǎn)染試劑指導(dǎo)南京星葉生物正是利用將核酸封裝在納米級脂質(zhì)體囊泡中的技術(shù)，開發(fā)出了Gemate系列轉(zhuǎn)染試劑。

魚精蛋白作為RNA遞送穩(wěn)定劑具有重要作用，其具體作用機(jī)制主要包括以下幾個方面：一、保護(hù)RNA免受降解魚精蛋白是一種天然陽離子肽混合物，由于其帶正電荷的特性，可以與帶負(fù)電荷的RNA通過相反電荷驅(qū)動耦合23。在生物系統(tǒng)中，RNA很容易被RNase降解，而魚精蛋白可以與RNA復(fù)合，形成穩(wěn)定的復(fù)合物，從而保護(hù)RNA免受降解1213。例如，通過將單鏈RNA（ssRNA）與帶正電荷的蛋白魚精蛋白復(fù)合，可以穩(wěn)定陰離子RNA1213。二、增強(qiáng)細(xì)胞穿透性魚精蛋白不僅可以保護(hù)RNA，還能增強(qiáng)RNA的穿透細(xì)胞的能力。魚精蛋白-RNA復(fù)合物的形成具有雙重功能，一方面保護(hù)RNA不被降解，另一方面增強(qiáng)其穿透進(jìn)入細(xì)胞的能力23。這種增強(qiáng)的細(xì)胞穿透性可能是由于魚精蛋白的陽離子性質(zhì)，使其能夠與細(xì)胞膜相互作用，促進(jìn)RNA的進(jìn)入細(xì)胞2。

RNA電穿孔高效轉(zhuǎn)染原代淋巴細(xì)胞：使用體外轉(zhuǎn)錄的mRNA通過電穿孔可以實(shí)現(xiàn)高基因轉(zhuǎn)染效率和低轉(zhuǎn)染相關(guān)毒性。例如，在用GFP或mCD62L轉(zhuǎn)染的受激原代人和鼠T淋巴細(xì)胞中觀察到90％以上的轉(zhuǎn)基因表達(dá)和80％以上的活細(xì)胞。GFPRNA對未刺激的人PBMC或鼠脾細(xì)胞進(jìn)行電穿孔，分別產(chǎn)生95％和56％的GFP?細(xì)胞。此外，基因表達(dá)迅速且持久，對經(jīng)過RNA電穿孔的T淋巴細(xì)胞未觀察到不良影響7。五、優(yōu)化共轉(zhuǎn)染方法整合共轉(zhuǎn)染和平行共轉(zhuǎn)染：研究不同的共轉(zhuǎn)染和連續(xù)轉(zhuǎn)染方法，特別是體外轉(zhuǎn)錄信使RNA（IVTmRNA）。對于在納米載體形成之前預(yù)混合的IVTmRNAs（整合共轉(zhuǎn)染）和同時用單獨(dú)形成的納米載體轉(zhuǎn)染細(xì)胞（平行共轉(zhuǎn)染），分析決定共轉(zhuǎn)染效率的定量參數(shù)。同時遞送siRNA和mRNA也表明整合方法的比較高共轉(zhuǎn)染效率，但由于兩個**運(yùn)營實(shí)體的峰值輸出在動力學(xué)上不同，連續(xù)交付的效率比較高?；瘜W(xué)轉(zhuǎn)染的效率可能取決于幾個因素，如使用的試劑類型、靶細(xì)胞的來源和性質(zhì)，以及選擇的DNA與試劑比例。

開發(fā)新型動物搖籃可以實(shí)現(xiàn)小動物的多重成像，提高成像效率。開發(fā)新型動物搖籃的小動物多重成像方式：采集和評估高通量多鼠成像：KimHunnyun、ImGeunHo和YoonYeup開發(fā)了一種可以修改和調(diào)整以適應(yīng)多種成像模型的新型動物搖籃4。與以往只能成像一只小鼠的搖籃不同，這個新的搖籃可以同時成像四只小鼠，還可以獲取具有PET/MRI和PET/CT圖像的高吞吐量多鼠成像的融合圖像。通過將PET動態(tài)成像技術(shù)應(yīng)用于高吞吐量MMI方法，還可以同時獲取動態(tài)腦圖像。七、紅外成像技術(shù)在畜牧業(yè)中的應(yīng)用紅外成像技術(shù)在畜牧業(yè)中具有廣泛的應(yīng)用前景。Infraredimaginganewnon-invasivemachinelearningtechnologyforanimalhusbandry：ManaseeChoudhury、TulikaSaikia和SantanuBanik介紹了紅外成像技術(shù)在畜牧業(yè)中的應(yīng)用5。紅外熱成像技術(shù)因其非侵入性、易于自動化和高靈敏度等特點(diǎn)，在動物疾病檢測和緩解方面的應(yīng)用越來越***。該技術(shù)可以確認(rèn)***動物身體部位溫度的升高，還可用于檢測排卵、雄性生育力、應(yīng)激水平、肉質(zhì)、種群規(guī)模等。由于其易于操作，可以作為疾病診斷的**篩查工具，但仍需要進(jìn)一步研究以獲得更準(zhǔn)確的診斷結(jié)果。影響物理轉(zhuǎn)染或機(jī)械轉(zhuǎn)染效率的因素在很大程度上取決于這些方法的基本原理。浙江武漢轉(zhuǎn)染試劑

由于CRISPR/Cas的發(fā)現(xiàn)，基因組編輯領(lǐng)域經(jīng)歷了一場變革。江蘇懸浮細(xì)胞轉(zhuǎn)染試劑

考慮細(xì)胞毒性低細(xì)胞毒性的轉(zhuǎn)染試劑對于保持細(xì)胞的活性和正常生理功能至關(guān)重要。評估細(xì)胞活力：可以通過檢測細(xì)胞的存活率、增殖能力等指標(biāo)來評估轉(zhuǎn)染試劑的細(xì)胞毒性。在研究不同轉(zhuǎn)染試劑對C2C12細(xì)胞的轉(zhuǎn)染效率時，通過優(yōu)化DNA:轉(zhuǎn)染劑比例和細(xì)胞密度，使所有試劑在達(dá)到較高轉(zhuǎn)染效率的同時，對細(xì)胞生長和活力的影響有限6。在比較不同轉(zhuǎn)染試劑遞送siRNA的攝取、敲低效率和毒性情況的研究中，新開發(fā)的CALNPRNAi轉(zhuǎn)染試劑轉(zhuǎn)染效率***高于傳統(tǒng)轉(zhuǎn)染試劑，同時毒性比較低7。選擇溫和的試劑：一些轉(zhuǎn)染試劑可能對細(xì)胞的毒性較小，例如基于脂質(zhì)的轉(zhuǎn)染試劑通常比基于病毒的轉(zhuǎn)染試劑更溫和。在顱內(nèi)遞送合成mRNA的研究中，使用常用的轉(zhuǎn)染試劑將合成mRNA遞送至小鼠大腦，結(jié)果表明該模型中合成mRNA可以成功遞送至大腦，且沒有可測量的毒性8。江蘇懸浮細(xì)胞轉(zhuǎn)染試劑