選擇合適的轉(zhuǎn)染試劑陽(yáng)離子脂質(zhì)體：如LipofectamineTM2000等陽(yáng)離子脂質(zhì)體是常用的轉(zhuǎn)染試劑。通過(guò)優(yōu)化轉(zhuǎn)染條件，如轉(zhuǎn)染前細(xì)胞融合度、質(zhì)粒質(zhì)量與脂質(zhì)體體積比及轉(zhuǎn)染時(shí)間等，可以提高轉(zhuǎn)染效率。例如，在脂質(zhì)體介導(dǎo)RNA干擾質(zhì)粒轉(zhuǎn)染雞成骨細(xì)胞的試驗(yàn)中，當(dāng)轉(zhuǎn)染前細(xì)胞融合達(dá)到90％以上，質(zhì)粒DNA與脂質(zhì)體比例為1:2.5時(shí)轉(zhuǎn)染效率比較高，并且在轉(zhuǎn)染后48h轉(zhuǎn)染效果比較好，對(duì)細(xì)胞的毒性作用較小4。二、利用天然陽(yáng)離子肽混合物——魚精蛋白作為穩(wěn)定劑和增強(qiáng)劑：魚精蛋白不僅可以作為肝素的中和藥物和緩釋胰島素配方中的化合物，還可以用于核酸的細(xì)胞遞送。自***作為轉(zhuǎn)染增強(qiáng)劑使用以來(lái)，魚精蛋白已被***用作RNA遞送的穩(wěn)定劑。它能保護(hù)RNA免受生物系統(tǒng)內(nèi)的降解，并增強(qiáng)其對(duì)細(xì)胞的穿透能力。例如，魚精蛋白穩(wěn)定的RNA遞送系統(tǒng)可以根據(jù)***目標(biāo)進(jìn)行調(diào)整，如與靶向抗體融合實(shí)現(xiàn)精確遞送、消化成細(xì)胞穿透肽提高轉(zhuǎn)染效率或與功能性聚合物非共價(jià)混合等。陽(yáng)離子 RNA 轉(zhuǎn)染試劑在結(jié)合 RNA 分子機(jī)制上存在多種差異。甘肅polyplus轉(zhuǎn)染試劑

轉(zhuǎn)染時(shí)間對(duì)奶牛子宮內(nèi)膜原代上皮細(xì)胞轉(zhuǎn)染的影響：在奶牛子宮內(nèi)膜原代上皮細(xì)胞中，應(yīng)用帶有FAM標(biāo)記的miRNA-185mimics為報(bào)告基因，檢測(cè)兩種不同轉(zhuǎn)染試劑（LipofectamineRNAiMAX與Lipofectamine2000）在細(xì)胞接種不同時(shí)間后的轉(zhuǎn)染效率33。結(jié)果顯示，無(wú)論使用哪種轉(zhuǎn)染試劑，12h的轉(zhuǎn)染效率均極***高于18、24h，LipofectamineRNAiMAX各時(shí)間點(diǎn)的轉(zhuǎn)染效率均極***高于Lipofectamine2000。并且，使用LipofectamineRNAiMAX作為轉(zhuǎn)染試劑時(shí)，12h的熒光強(qiáng)度也比較高。這說(shuō)明在奶牛子宮內(nèi)膜原代上皮細(xì)胞中，選擇合適的轉(zhuǎn)染試劑和轉(zhuǎn)染時(shí)間可以提高轉(zhuǎn)染效率。同時(shí)，該研究未明確轉(zhuǎn)染對(duì)細(xì)胞死亡的影響，但可以進(jìn)一步研究不同轉(zhuǎn)染條件下細(xì)胞的存活率，以確定在提高轉(zhuǎn)染效率的同時(shí)降低細(xì)胞死亡的比較好條件。鄭州轉(zhuǎn)染試劑脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染試劑的凍融被認(rèn)為是另一個(gè)可能影響轉(zhuǎn)染效率的潛在因素。

RNA電穿孔高效轉(zhuǎn)染原代淋巴細(xì)胞：使用體外轉(zhuǎn)錄的mRNA通過(guò)電穿孔可以實(shí)現(xiàn)高基因轉(zhuǎn)染效率和低轉(zhuǎn)染相關(guān)毒性。例如，在用GFP或mCD62L轉(zhuǎn)染的受激原代人和鼠T淋巴細(xì)胞中觀察到90％以上的轉(zhuǎn)基因表達(dá)和80％以上的活細(xì)胞。GFPRNA對(duì)未刺激的人PBMC或鼠脾細(xì)胞進(jìn)行電穿孔，分別產(chǎn)生95％和56％的GFP?細(xì)胞。此外，基因表達(dá)迅速且持久，對(duì)經(jīng)過(guò)RNA電穿孔的T淋巴細(xì)胞未觀察到不良影響7。五、優(yōu)化共轉(zhuǎn)染方法整合共轉(zhuǎn)染和平行共轉(zhuǎn)染：研究不同的共轉(zhuǎn)染和連續(xù)轉(zhuǎn)染方法，特別是體外轉(zhuǎn)錄信使RNA（IVTmRNA）。對(duì)于在納米載體形成之前預(yù)混合的IVTmRNAs（整合共轉(zhuǎn)染）和同時(shí)用單獨(dú)形成的納米載體轉(zhuǎn)染細(xì)胞（平行共轉(zhuǎn)染），分析決定共轉(zhuǎn)染效率的定量參數(shù)。同時(shí)遞送siRNA和mRNA也表明整合方法的比較高共轉(zhuǎn)染效率，但由于兩個(gè)**運(yùn)營(yíng)實(shí)體的峰值輸出在動(dòng)力學(xué)上不同，連續(xù)交付的效率比較高。

優(yōu)化轉(zhuǎn)染條件MOI值對(duì)Lentivirus載體轉(zhuǎn)染許旺細(xì)胞的影響：以Lentivirus三質(zhì)粒系統(tǒng)構(gòu)建病毒載體，在體外對(duì)原代大鼠許旺細(xì)胞進(jìn)行轉(zhuǎn)染，研究不同MOI值（***復(fù)數(shù)）對(duì)轉(zhuǎn)染效率的影響32。結(jié)果顯示，在病毒轉(zhuǎn)染3天后，各不同MOI值的培養(yǎng)孔中開始出現(xiàn)少量熒光反應(yīng)，第5天時(shí)熒光數(shù)量明顯增多，第7天達(dá)到高峰，第9天與第7天變化不明顯。從細(xì)胞轉(zhuǎn)染效率來(lái)看，不同的MOI值效果不同，MOI值為5和10時(shí)轉(zhuǎn)染效率較高。這表明在使用Lentivirus載體轉(zhuǎn)染許旺細(xì)胞時(shí)，優(yōu)化MOI值可以提高轉(zhuǎn)染效率。同時(shí)，未提及該轉(zhuǎn)染過(guò)程對(duì)細(xì)胞死亡的影響，但可以通過(guò)進(jìn)一步的實(shí)驗(yàn)，如細(xì)胞活性檢測(cè)等，來(lái)確定在提高轉(zhuǎn)染效率的同時(shí)對(duì)細(xì)胞死亡的影響。由于CRISPR/Cas的發(fā)現(xiàn)，基因組編輯領(lǐng)域經(jīng)歷了一場(chǎng)變革。

考慮實(shí)驗(yàn)?zāi)康暮蛻?yīng)用場(chǎng)景不同的實(shí)驗(yàn)?zāi)康暮蛻?yīng)用場(chǎng)景可能需要不同類型的轉(zhuǎn)染試劑。***應(yīng)用：如果轉(zhuǎn)染試劑用于基因***或藥物研發(fā)等應(yīng)用，那么需要選擇具有良好生物相容性和安全性的試劑。在安全有效的遞送mRNA使用改性PEI基脂質(zhì)聚合物的研究中，探索了All-Fect和Leu-FectC作為新型轉(zhuǎn)染試劑，這些試劑具有優(yōu)異的生物相容性、高效的遞送能力和強(qiáng)大的溶酶體逃逸能力，可直接增加mRNA穩(wěn)定性并促進(jìn)高效基因翻譯，適用于基因***等應(yīng)用4?；A(chǔ)研究：對(duì)于基礎(chǔ)研究實(shí)驗(yàn)，可能更注重轉(zhuǎn)染效率和實(shí)驗(yàn)的可重復(fù)性。在不同轉(zhuǎn)染方式用于modRNA轉(zhuǎn)染人脂肪干細(xì)胞的初步研究中，比較了不同轉(zhuǎn)染方式的轉(zhuǎn)染效率和蛋白表達(dá)情況，以及在體內(nèi)促進(jìn)血管再生的效果，為基礎(chǔ)研究提供了參考10。綜上所述，選擇**適合的RNA轉(zhuǎn)染試劑需要綜合考慮轉(zhuǎn)染效率、細(xì)胞毒性、RNA需求、血清兼容性、多因子轉(zhuǎn)染能力以及實(shí)驗(yàn)?zāi)康暮蛻?yīng)用場(chǎng)景等多個(gè)因素。在選擇轉(zhuǎn)染試劑時(shí)，可以參考已有的研究文獻(xiàn)，進(jìn)行預(yù)實(shí)驗(yàn)以評(píng)估不同試劑的性能，并根據(jù)實(shí)驗(yàn)需求和條件選擇**合適的轉(zhuǎn)染試劑。化學(xué)轉(zhuǎn)染的效率可能取決于幾個(gè)因素，如使用的試劑類型、靶細(xì)胞的來(lái)源和性質(zhì)，以及選擇的DNA與試劑比例。轉(zhuǎn)染試劑脂質(zhì)體

在聚葡萄糖、精胺(PG)偶聯(lián)物和第四代聚酰胺樹狀大分子(PAMAM G4)的幫助下。甘肅polyplus轉(zhuǎn)染試劑

對(duì)于容易轉(zhuǎn)染的貼壁細(xì)胞如人胚腎細(xì)胞（HEK293）和人宮頸*細(xì)胞（HeLa），脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染效率相對(duì)較高。這些細(xì)胞具有較強(qiáng)的內(nèi)吞能力，能夠有效地?cái)z取脂質(zhì)體-核酸復(fù)合物。例如，在標(biāo)準(zhǔn)的轉(zhuǎn)染條件下，HEK293細(xì)胞的轉(zhuǎn)染效率可以達(dá)到50%-70%。而對(duì)于一些難轉(zhuǎn)染的貼壁細(xì)胞，如原代肝細(xì)胞和某些神經(jīng)細(xì)胞，其轉(zhuǎn)染效率較低。這是因?yàn)樗鼈兊募?xì)胞膜結(jié)構(gòu)比較復(fù)雜，可能存在較厚的糖萼或者緊密的細(xì)胞間連接，阻礙了脂質(zhì)體-核酸復(fù)合物的進(jìn)入。例如，原代肝細(xì)胞的轉(zhuǎn)染效率可能只有10%-20%。

一般來(lái)說(shuō)，貼壁細(xì)胞對(duì)脂質(zhì)體的耐受性相對(duì)較好。但是，在高濃度脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染的情況下，即使是耐受性好的細(xì)胞也會(huì)受到影響。例如，HeLa細(xì)胞在高濃度脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染時(shí)，可能會(huì)出現(xiàn)細(xì)胞膜完整性受損，表現(xiàn)為細(xì)胞內(nèi)乳酸脫氫酶（LDH）釋放增加，細(xì)胞的代謝活動(dòng)也會(huì)受到一定程度的干擾。對(duì)于難轉(zhuǎn)染的貼壁細(xì)胞，由于其本身比較脆弱，較低濃度的脂質(zhì)體也可能產(chǎn)生明顯的細(xì)胞毒性。比如原代神經(jīng)細(xì)胞，脂質(zhì)體可能會(huì)破壞其精細(xì)的神經(jīng)突起結(jié)構(gòu)，影響細(xì)胞的正常生理功能。 甘肅polyplus轉(zhuǎn)染試劑