熒光染料標記蛋白或肽技術是一種常見的蛋白質體外標記技術。除了GFP等熒光蛋白的融合表達外，目標蛋白還可以通過熒光染料標記直接進行下游實驗操作，如***跟蹤、細胞分選等。

FITC熒光標記的原理是什么？

熒光標記所依賴的化合物稱為熒光材料。熒光材料是指具有共軛雙鍵系統(tǒng)化學結構的化合物。當受到紫外線或藍紫光的照射時，它可以被刺激為刺激狀態(tài)。當激發(fā)狀態(tài)恢復到基本狀態(tài)時，它會發(fā)出熒光。蛋白質熒光標記技術利用熒光材料的共價結合在目標分子的基團上，利用其熒光特性提供研究對象的信息。 Cy3 (Cyanine 3) 是一種發(fā)橘黃色熒光的花青素熒光染料。成都熒光染料Fluor 750

熒光染料:能發(fā)出熒光的染料。在吸收紫外線或可見光后，能把短波長的光轉變?yōu)椴ㄩL較長的可見光波而反射出來，呈閃亮的鮮艷色彩。例如，酸性曙紅、熒光黃、紅汞以及某些分散染料等。它們大多是含有苯環(huán)或雜環(huán)并帶有共軛雙鍵的化合物。熒光染料可以單獨使用，也可以組合成復合熒光染料使用。其中復合熒光染料是利用熒光共振能量轉移技術合成的熒光染料，由距離非常近、能量可以在彼此間傳遞的一個供體及一個受體熒光物分子所組成。復合染料在受體分子的激發(fā)波長被激發(fā)，在供體分子的發(fā)射波長發(fā)射一個光子。熒光染料發(fā)展非常迅速，已開發(fā)的用于科研和臨床應用的熒光染料已基本覆蓋了由紫外到可見光及紅外的整個光譜范圍。成都熒光染料Fluor 750D-熒光素鉀鹽熒光染料。

三、流式細胞儀分析1、取對數(shù)生長期的細胞，接種到孔板，過夜培養(yǎng)。2、如果要進行藥物刺激，在細胞中加入感興趣的藥物進行干預，繼續(xù)培養(yǎng)一定時間后，收集細胞，PBS清洗2次。3、加入Rhodamine123工作液重懸細胞，37℃避光孵育15min或更長時間。【注意】：由于細胞種類和實驗體系不同，Rhodamine123工作液濃度和孵育時間可以根據(jù)預實驗或參考文獻自行調整。4、用流式細胞儀檢測。

四、實驗案例1、取對數(shù)生長期A549細胞接于六孔板（1*106+2mlDMEM培養(yǎng)基）,37℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)4-24h待其貼壁，以便后續(xù)實驗操作.2、棄掉培養(yǎng)液，PBS洗滌兩次.3、用培養(yǎng)基（無血清）稀釋Rh123母液制備1～20μMRh123工作液。具體工作濃度取決于細胞類型和細胞濃度。4、將Rh123工作液加入六孔板并在37℃下孵育30分鐘.5、去除Rh123工作液并用PBS洗滌三次細胞去除背景色.6、熒光顯微鏡觀察.

DiD，DiO，DiI，DiR和DiS染料是一族親脂性的熒光染料，可以用來染細胞膜和其它脂溶性生物結構。當與細胞膜結合后其熒光強度**增強，這類染料有著很高的淬滅常數(shù)和激發(fā)態(tài)壽命。一旦對細胞染色，這類染料在整個細胞膜上擴散，比較好濃度時可以使整個細胞膜染色。它們的熒光顏**分明顯：DiI（橙色熒光），DiO（綠色熒光），DiD（紅色熒光）和 DiR （深紅色熒光）這使得他們可以用來對活細胞進行多色成像和流式分析。DiI和DiO可以分別用標準的 FITC和TRITC的濾光片。DiD可以用 633 nm He–Ne 激光器激發(fā)，有著比DiI更長的激發(fā)波長和發(fā)射波長，在細胞和組織染色中更有價值。 DiR的紅外熒光可以穿透細胞和組織，在***成像中用來示蹤。D-熒光素鉀鹽南京星葉生物科技有限公司。

管可用于實驗室的熒光團數(shù)量眾多，但這些染料通常屬于以下三組之一：熒光染料:這些是用于在體外標記生物相關分子的小型有機天然或合成熒光分子。該組中的一些熒光染料包括熒光素、溴化乙錠和花青。熒光蛋白:這些是較大的、生物制造的蛋白質，由于它們的大分子結構而發(fā)出熒光。GFP、RFP和YFP是屬于該組的一些染料。量子點:這些高熒光合成納米晶體由半導體材料制成。隨著熒光基本特性的廣泛應用和該領域的顯著進步，已經(jīng)針對特定應用和儀器開發(fā)和優(yōu)化了數(shù)百種活性熒光染料。同樣，多年來，大量復雜的熒光技術（例如，F(xiàn)RET、TRF、FP、FRAP、FACS、FCS）也在不斷發(fā)展。熒光染料，由于靈敏度高，操作方便，逐漸取代了放射性同位素作為檢測標記，其應用于熒光探針，細胞染色等。甘肅北京熒光染料

生物發(fā)光是利用熒光素酶報告基因在體內表達產(chǎn)生的熒光蛋白與體外注射的熒光素底物發(fā)生化學反映產(chǎn)生熒光。成都熒光染料Fluor 750

SUPERGreenI（10,000×DMSO溶液，電泳級）儲存條件及注意事項4℃避光可保存12個月。本品用DMSO溶解，因DMSO的熔點是18.5℃，使用前請放置到室溫充分溶解。SUPERGreenI核酸染料特點●無毒性：屬花菁類染料，容易生物降解，無致*毒性?！耢`敏度高：至少可檢出20pgDNA，高于EB染色法25～100倍。●信噪比高：樣品熒光信號強，背景信號低?！癫僮骱唵危簾o須脫色或沖洗，即可直接用紫外凝膠透射儀或可見光透射儀觀察?！襁m用范圍廣：可適用于多種凝膠電泳方法：瓊脂糖凝膠、聚丙烯酰胺凝膠電泳、脈沖電場凝膠電泳和毛細管電泳等。●使用方便：對分子生物學中常用的酶（如：Taq酶、反轉錄酶、內切酶、T4連接酶等）沒有抑制作用。●經(jīng)濟：價格比銀染便宜。成都熒光染料Fluor 750