注:建議對(duì)每只動(dòng)物模型都需要建立熒光素酶動(dòng)力學(xué)曲線,從而確定比較高信號(hào)檢測(cè)時(shí)間和信號(hào)平臺(tái)期。保存和操作的過(guò)程中都要避光。另外水溶性儲(chǔ)存液過(guò)濾除菌后,可以-20℃或-80℃分裝凍存,避免反復(fù)凍融。如果有條件,對(duì)儲(chǔ)存液充氮?dú)饣驓鍤猓ǚ乐寡趸€(wěn)定性和保存時(shí)間更長(zhǎng)。 注射方式,動(dòng)物類(lèi)型以及體重等都會(huì)影響信號(hào)的發(fā)射,因此建議每次實(shí)驗(yàn)都要做熒光素酶動(dòng)力學(xué)曲線,確定比較好信號(hào)平臺(tái)期和比較好的檢測(cè)時(shí)間。熒光素鉀鹽和熒光素鈉鹽應(yīng)用上沒(méi)有差別,兩者的差別在于物理性狀上如外形和溶解性。鈉鹽的水溶性高于鉀鹽。從目前發(fā)表的文獻(xiàn)來(lái)看,鉀鹽的使用率遠(yuǎn)高于鈉鹽,尤其是體內(nèi)實(shí)驗(yàn)。兩者功效相同。 為了您的安全和健康,請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。DiD,DiO,DiI,DiR和DiS染料是一族親脂性的熒光染料,可以用來(lái)染細(xì)胞膜和其它脂溶性生物結(jié)構(gòu)。內(nèi)蒙古長(zhǎng)沙熒光染料
PI是一種可對(duì)DNA染色的細(xì)胞核染色試劑,它在嵌入雙鏈DNA后釋放紅色熒光。常用于細(xì)胞凋亡(apoptosis)或細(xì)胞壞死(necrosis)的檢測(cè),常用于流式細(xì)胞儀分析。盡管PI不能通過(guò)活細(xì)胞膜,但卻能穿過(guò)破損的細(xì)胞膜而對(duì)核染色。PI經(jīng)常被用來(lái)與Calcein,AM、Hoechst33258或Hoechst33342等一起使用,能同時(shí)對(duì)活細(xì)胞和死細(xì)胞染色。PI-DNA復(fù)合物的激發(fā)和發(fā)射波長(zhǎng)分別為535nm和615nm。2.染色過(guò)程(1)將1/10培養(yǎng)基體積的PI染色液加入到細(xì)胞培養(yǎng)基中(也可以用1/10濃度的PI緩沖液代替培養(yǎng)基)。(2)在37℃培養(yǎng)細(xì)胞10~20分鐘。(3)用PBS或合適的緩沖液洗滌細(xì)胞兩次。(4)用535nm激發(fā)波長(zhǎng),615nm發(fā)射波長(zhǎng)的濾光器的熒光顯微鏡觀察細(xì)胞。儲(chǔ)存條件:-20℃干燥避光保存,有效期一年。注意事項(xiàng):PI對(duì)人體有刺激性,請(qǐng)注意適當(dāng)防護(hù)。ivis熒光染料Cy5.5熒光素衍生物具有高吸收率優(yōu)異的熒光量子產(chǎn)率和良好的水溶性是流式細(xì)胞儀和免疫熒光中常用的熒光標(biāo)記之一。
CY7是一種CY染料。CY為花菁(Cyanine)的縮寫(xiě),是由奇數(shù)個(gè)甲基單元連接的兩個(gè)氮原子組成的化合物。菁類(lèi)化合物具有波長(zhǎng)長(zhǎng)、吸收和發(fā)射可調(diào)、消光系數(shù)高的特點(diǎn)CY系染料常被用于蛋白、抗體以及小分子化合物的標(biāo)記,對(duì)于蛋白抗體的標(biāo)記,可以通過(guò)簡(jiǎn)單的混合反應(yīng)來(lái)完成結(jié)合,下面我們介紹了蛋白抗體標(biāo)記的標(biāo)記方法,具有一定的參考意義。一、比較好蛋白制備1)為獲得標(biāo)記效果,請(qǐng)制備蛋白(抗體)濃度為2mg/mL。2)蛋白溶液的pH值為8.5±0.5。如果pH值低于8.0,應(yīng)使用1M3)如果蛋白濃度低于2mg/mL,標(biāo)記效率會(huì)**降低。為獲得比較好標(biāo)記效率,建議**終蛋白濃度范圍為2-10mg/mL。4)蛋白必須在不含伯胺(如Tris或甘氨酸)的緩沖液中,和銨離子,否則會(huì)影響標(biāo)記效率。2.染色制備(以CY3-NHS酯為例)將無(wú)水DMSO加入CY3-NHS酯小瓶中,制備成10mM儲(chǔ)備液。通過(guò)移液器或渦旋混合均勻計(jì)算。使用前需先使用縮合液(500μg/mL)(HY-D0178)活化另一個(gè)可進(jìn)行后續(xù)標(biāo)記實(shí)驗(yàn)。
D-熒光素是熒光素酶 (Luc) 的天然底物,可催化螢火蟲(chóng)產(chǎn)生典型的黃綠色光。該反應(yīng)的 560 nm 化學(xué)發(fā)光在幾秒鐘內(nèi)達(dá)到峰值,當(dāng)?shù)孜餆晒馑剡^(guò)量時(shí),光輸出與熒光素酶濃度成正比。熒光素酶 (luc) 基因是用于研究和藥物篩選的流行報(bào)告基因?;瘜W(xué)發(fā)光技術(shù)幾乎沒(méi)有背景,使得 luc 報(bào)告基因成為檢測(cè)低水平基因表達(dá)的理想選擇。標(biāo)準(zhǔn)閃爍計(jì)數(shù)器可以可靠地測(cè)量低至 0.02 pg 的熒光素酶。除了作為基因表達(dá)報(bào)告者的作用外,熒光素酶還常用于極其靈敏的 ATP 檢測(cè)中[1]。我們提供螢火蟲(chóng)熒光素酶 (HY-P1004)、熒光素游離酸 (HY-12591A) 及其水溶性鈉鹽 (HY-12591) 和鉀鹽 (HY-12591B)。異硫氰酸熒光素含有一個(gè)異硫氰酸酯反應(yīng)基團(tuán)這有助于其對(duì)通常存在于生物分子中的動(dòng)漫和巰基基團(tuán)具有反應(yīng)性。
藻紅蛋白-藻紅蛋白(PE)是一種紅色蛋白色素復(fù)合物,屬于藻膽蛋白家族。它可以在紅藻和隱植物中找到,它作為葉綠素色素的附屬物。在生物科學(xué)中,熒光團(tuán)可以與蛋白質(zhì)結(jié)合,例如用于抗原檢測(cè)的抗體等,因?yàn)樗軌虬l(fā)出明亮的熒光。由于熒光團(tuán)往往會(huì)很快發(fā)生光漂白,因此很少在熒光顯微鏡中使用。它經(jīng)常用于流式細(xì)胞術(shù)?!鶆e藻藍(lán)蛋白(APC)-與藻紅蛋白一樣,別藻藍(lán)蛋白也屬于藻膽蛋白家族,是從紅藻中分離出來(lái)的。在594和633nm的激光線激發(fā)下,熒光團(tuán)的比較大吸光度在650nm處,而熒光發(fā)射峰在66nm處。與熒光素偶聯(lián)物相比,熒光團(tuán)的靈敏度已顯示高5至10倍,并具有許多其他有益特性,包括大斯托克斯位移、高水溶性、長(zhǎng)波長(zhǎng)發(fā)射和耐猝滅。雖然別藻藍(lán)蛋白通常不用于需要光穩(wěn)定性的應(yīng)用,但它***用于流式細(xì)胞術(shù)、ELISA、微陣列等過(guò)程以及各種依賴高靈敏度的應(yīng)用。熒光染料可以單獨(dú)使用,也可以組合成復(fù)合熒光染料使用。內(nèi)蒙古長(zhǎng)沙熒光染料
PI常用于細(xì)胞凋亡(apoptosis)或細(xì)胞壞死(necrosis)的檢測(cè),常用于流式細(xì)胞儀分析。內(nèi)蒙古長(zhǎng)沙熒光染料
琥珀酰亞胺酯(Succinimidylesters)/NHS酯活性熒光染料用于標(biāo)記抗體,蛋白質(zhì),肽,胺修飾的寡核苷酸和其他生物分子上的游離氨基(-NH2)2、馬來(lái)酰亞胺(Maleimides)活性熒光染料用于標(biāo)記抗體,蛋白質(zhì)和肽上的巰基3、疊氮化物(Azides)活性熒光染料通過(guò)點(diǎn)擊化學(xué)法(Click)標(biāo)記乙烯基4、炔烴(Alkynes)活性熒光染料通過(guò)點(diǎn)擊化學(xué)方法標(biāo)記疊氮化物5、羧酸(Carboxylicacids)活性熒光染料經(jīng)碳二亞胺預(yù)活化后用于標(biāo)記胺或用于醇的Steglich酯化6、氨基(Amines)活性熒光染料具有游離氨基的熒光染料,用于與各種親電子化合物(如活化的酯和環(huán)氧化物)偶聯(lián)。內(nèi)蒙古長(zhǎng)沙熒光染料