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腦脊液提取試劑盒應(yīng)用

來源: 發(fā)布時(shí)間:2024-01-18

為獲得外泌體的大小、濃度、形態(tài)及蛋白質(zhì)組成等信息,可以通過電鏡、動(dòng)態(tài)光散射、納米顆粒跟蹤分析儀、蛋白質(zhì)免疫印跡、酶聯(lián)免疫吸附法、流式細(xì)胞儀等對(duì)外泌體進(jìn)行表征。通過電鏡可獲得外泌體的形態(tài)信息,不同類型的顯微鏡由于操作環(huán)境不同,得到的外泌體形態(tài)存在差異。例如,在掃描電鏡、透射電鏡和原子力顯微鏡中,外泌體呈現(xiàn)囊泡獨(dú)有的茶托形,可能由于樣品在固定或染色過程中極度脫水,導(dǎo)致外泌體塌陷所致。與之相反,在冷凍電鏡中外泌體呈現(xiàn)圓形,由于不會(huì)脫水變性,所得的外泌體形態(tài)可能更加接近囊泡的真實(shí)狀態(tài)。另外,由于透射電鏡和原子力顯微鏡具有較高分辨率,也能夠提供外泌體磷脂雙分子層厚度、粒徑分布等信息。人體內(nèi)多種細(xì)胞在正常及病理狀態(tài)下均可分泌外泌體,包括干細(xì)胞、免疫細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞、及平滑肌細(xì)胞等。腦脊液提取試劑盒應(yīng)用

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外泌體可以由體內(nèi)或體外培養(yǎng)的幾乎所有類型的細(xì)胞分泌,并廣fan存在于血漿、膽汁、尿液、母乳、唾液、胸腔積液、淋巴、胃酸、支氣管肺泡灌洗液、腦脊液、眼淚、滑膜液、羊水、腹水、鼻分泌物和子宮抽吸物液體等體液中。目前,基于不同的分離原理,研究者建立了五種主要的提取純化技術(shù),分別為基于質(zhì)量密度的超速離心技術(shù)、基于粒徑大小的分離技術(shù)、基于溶解性質(zhì)的聚合物沉淀技術(shù)、基于免疫親和原理的分離技術(shù)和基于流體性質(zhì)的微流控技術(shù)。外周血外泌體提取試劑盒原理干細(xì)胞外泌體有減少細(xì)胞凋亡、促進(jìn)血管生成、抑制纖維化等重要生物學(xué)功能,在調(diào)控組織再生方面有好的前景。

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外泌體是細(xì)胞間信息傳遞的重要“信使”,可通過三種方式介導(dǎo)細(xì)胞通訊:(1)外泌體以旁分泌的方式與靶細(xì)胞相互作用,通過受體–配體作用黏附到靶細(xì)胞表面,隨后被內(nèi)吞入靶細(xì)胞,或直接將內(nèi)容物釋放到靶細(xì)胞內(nèi),從而激huo靶細(xì)胞;(2)外泌體的胞外膜蛋白可以被蛋白酶切割,產(chǎn)生的片段可以與靶細(xì)胞的細(xì)胞表面受體結(jié)合,從而激huo靶細(xì)胞;(3)外泌體還可以與靶細(xì)胞直接接觸發(fā)生膜融合,導(dǎo)致外泌體中的蛋白和核酸非選擇性轉(zhuǎn)移到目標(biāo)細(xì)胞,從而引起靶細(xì)胞的響應(yīng)。通過介導(dǎo)細(xì)胞間的通訊,外泌體不jin能夠參與多種生理過程,比如消除胞內(nèi)陳舊分子、呈遞抗原、分化調(diào)節(jié)性T淋巴細(xì)胞或髓樣細(xì)胞以抑制免疫反應(yīng),而且還可以參與疾病形成的病理過程,如通過與受體細(xì)胞的相互作用傳播病原物質(zhì)、促進(jìn)中流轉(zhuǎn)移過程中的血管生長(zhǎng)和中流細(xì)胞遷移。

外泌體的生物發(fā)生途徑主要包括三個(gè)關(guān)鍵的檢查點(diǎn):ILV的形成,阻止MVEs的降解以及MVEs和細(xì)胞膜的融合,這三個(gè)檢查點(diǎn)都包含在內(nèi)體相關(guān)的囊泡運(yùn)輸過程中。RABGTPase定位到特定膜結(jié)構(gòu)的表面,通過招募效應(yīng)因子來調(diào)節(jié)相應(yīng)膜結(jié)構(gòu)的囊泡運(yùn)輸,例如,在內(nèi)體溶酶體運(yùn)輸網(wǎng)絡(luò)中,RAB5調(diào)節(jié)早期內(nèi)體的形成及相互融合;內(nèi)體膜上RAB5到RAB7的轉(zhuǎn)換調(diào)節(jié)早期向晚期內(nèi)體的轉(zhuǎn)變;RAB7調(diào)節(jié)晚期內(nèi)體/MVEs與溶酶體的融合來降解ILVs;RAB27調(diào)節(jié)MVEs與細(xì)胞膜的對(duì)接和融合來釋放ILVs形成外泌體。內(nèi)吞的膜蛋白,特別是受體酪氨酸激酶家族的表皮生長(zhǎng)因子受體,定位到內(nèi)體和MVEs,通過MVEs和溶酶體融合來進(jìn)入溶酶體降解,此過程受多種RABGTPases和ESCRT復(fù)合體的調(diào)控。有望在外泌體和微囊泡生理功能的分析研究上起重大貢獻(xiàn)。

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近年來,生物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域上,干細(xì)胞在防病抗病、延緩衰老、組織再生等方面發(fā)揮著巨大的潛力,成為人們關(guān)注的熱點(diǎn)。隨著研究的不斷深入,新的風(fēng)口再次出現(xiàn),它那就是——外泌體。外泌體是指包含了復(fù)雜RNA和蛋白質(zhì)的小膜泡(30-150nm)?,F(xiàn)今,其特指直徑在40-100nm的盤狀囊泡。外泌體中含有豐富的蛋白質(zhì)和遺傳物質(zhì)DNA以及RNA等。它的存在,就像是生物界的郵差,可以在細(xì)胞間運(yùn)輸和轉(zhuǎn)移生物活性分子,是細(xì)胞間通訊交流的載體。上海宇玫博生物科技有限公司。有報(bào)導(dǎo)指出,外泌體內(nèi)miRNA參與促進(jìn)血管新生、抗癥性和促進(jìn)膠原蛋白沉淀等一系列過程。外周血外泌體提取試劑盒原理

有關(guān)外泌體分泌和攝取及其組成、“運(yùn)載物”和相應(yīng)功能的精確分子機(jī)制剛剛開始研究。腦脊液提取試劑盒應(yīng)用

目前,在各種健康與疾病模型中都發(fā)現(xiàn),外泌體通過分子信息傳遞扮演著重要的角色。外泌體還越來越多地被認(rèn)為是疾病的生物標(biāo)志物和預(yù)后因子,具有重要的臨床診斷和治理意義。除此之外,它們還有潛力被用于臨床,作為基因和藥物遞送的載體。健康人和多種疾病的患者會(huì)將含有不同RNA和蛋白質(zhì)成分的外泌體釋放到體液循環(huán)中,因其特殊性,外泌體可以作為生物標(biāo)志物來對(duì)疾病進(jìn)行檢測(cè)。例如,從血液或尿液中分離的外泌體可以用作病癥、心臟病的診斷和預(yù)后的指標(biāo)。腦脊液提取試劑盒應(yīng)用

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